基因組DNA抽提

基因組DNA抽提:

    通過基因組DNA抽提試劑盒可以抽提動物組織、鼠尾、培養(yǎng)細(xì)胞、細(xì)菌、酵母、動物血液、昆蟲以及固定組織的包括基因組DNA在內(nèi)的總DNA。通過試劑盒說明書中提供的不同操作方法，可以抽提除植物樣品外的幾乎所有樣品中的總DNA。

步驟：
    樣品首先被蛋白酶K消化，隨后加入適合DNA結(jié)合到純化柱上的緩沖液，然后加入到純化柱內(nèi)。通過高速離心，使DNA在穿過純化柱的瞬間，結(jié)合到純化柱上，隨后通過兩次洗滌去除各種雜質(zhì)，zui后通過洗脫液把DNA洗脫下來。整個過程無需酚氯仿抽提，無需酒精沉淀，樣品裂解后僅需約15分鐘即可完成。

效率：
   1. 通過試劑盒純化得到的基因組DNA的長度zui長可達(dá)50kb左右，平均為30kb左右，zui短為100bp的DNA也可以被純化。如需獲得更長的基因組DNA，對于哺乳動物樣品，包括組織或細(xì)胞等，可以使用特定的試劑盒抽提。
    2.通過試劑盒獲得的總DNA，OD260/OD280的范圍通常在1.7至1.9之間。
    3.試劑盒可以抽提少至數(shù)百個細(xì)胞，多至25mg組織、0.5-1cm鼠尾、500萬個培養(yǎng)細(xì)胞、20億個細(xì)菌或5000萬個酵母。

     4.樣品用量過多，反而會影響抽提效果。如果待抽提樣品的DNA含量小于5ng，建議加入適當(dāng)量的carrier DNA，例如poly-dT或其它對后續(xù)實驗沒有干擾的DNA，也可以加入適當(dāng)量的carrier RNA，例如yeast RNA等，以改善抽提效果。
    5.試劑盒的標(biāo)準(zhǔn)操作步驟抽提得到的總DNA會含有少量RNA，但如果按照一般的試劑盒可選步驟加入RNase A，就可以獲得不含RNA的高純度總DNA。含有RNA的總DNA可以用于PCR，但對于某些其它的后續(xù)反應(yīng)可能會產(chǎn)生一些影響。

 DNA抽提時樣本抽提的范圍：  

    純化柱對于DNA的zui大容量約為30微克。通常每200萬Hela細(xì)胞或500萬淋巴細(xì)胞可以抽提得到15-25微克總DNA，每25mg肝、腦、腎組織可以抽提得到10-30微克總DNA，每25毫克心、肺組織可以抽提得到5-10微克總DNA，每10mg脾組織可以抽提得到5-30微克總DNA，每1.2cm小鼠尾尖或0.3cm大鼠尾尖可以獲得10-25微克總DNA。
    
DNA抽提小量試劑盒包裝清單：

保存條件：
    蛋白酶K-20℃保存，其余均室溫保存。一年有效。蛋白酶K室溫（15-25℃）存放一周，活力無明顯下降。

DNA抽提注意事項：
    1.抽提細(xì)菌、酵母樣品時還需要一些特定的試劑，詳情請參考相關(guān)實驗步驟。
    2.如需制備不含RNA的高純度總DNA，需自備RNase A。
    3.溫度較低時樣品裂解液A或樣品裂解液B中可能會有沉淀產(chǎn)生，屬正常現(xiàn)象。使用前必須檢查一遍。如有沉淀，55℃水浴孵育使沉淀溶解，混勻后使用。
   4.*次使用前洗滌液I需添加7ml無水乙醇，洗滌液II需添加24ml無水乙醇，混勻，并在瓶上做好標(biāo)記。
    5.試劑盒需使用55℃水浴，請?zhí)崆白骱脺?zhǔn)備。
    6.除特別說明外，每次Vortex應(yīng)控制在5-10秒左右。
    7.試劑盒所有操作均在室溫進(jìn)行，操作時無需冰浴。所有離心也均在室溫進(jìn)行。
    8.廢液收集管在一次抽提中需多次使用，切勿中途丟棄。
    9.參考使用說明，從某些樣品中抽提總DNA不需要使用樣品裂解液A。 
    10.為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。